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RMC 大鼠腎系膜細胞簡介

起源與背景

細胞特性

1. 形態(tài)與生長特性
   • 形態(tài)：貼壁生長，呈梭形或星形，具有長的細胞突起，匯合時可形成多層生長（部分克隆因永生化特性可能喪失接觸抑制）。
   • 增殖能力：永生性細胞系，可長期傳代（通常建議使用 20 代以內(nèi)細胞以保持特性穩(wěn)定），增殖速度中等，傳代周期約 3~5 天（密度達 70%~80% 時傳代）。
2. 功能特性
   • 基質(zhì)合成：可合成和分泌 IV 型膠原、層粘連蛋白、纖連蛋白等細胞外基質(zhì)成分，其表達水平受細胞因子（如 TGF-β、IL-1β）調(diào)控，模擬病理狀態(tài)下系膜基質(zhì)增生（如糖尿病腎病中的系膜擴張）。
   • 炎癥與免疫反應(yīng)：對脂多糖（LPS）、血小板衍生生長因子（PDGF）、血管緊張素 II（Ang II）等刺激敏感，可釋放炎癥因子（如 TNF-α、IL-6）和趨化因子（如 MCP-1），參與腎小球內(nèi)炎癥細胞募集。
   • 收縮功能：表達平滑肌肌動蛋白（α-SMA），具有類似平滑肌的收縮特性，可響應(yīng)血管活性物質(zhì)（如去甲腎上腺素）調(diào)節(jié)腎小球濾過率。

培養(yǎng)與保存

1. 培養(yǎng)條件
   • 培養(yǎng)基：常用含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM 培養(yǎng)基（高糖或低糖型，根據(jù)研究需求選擇，如高糖培養(yǎng)基可模擬糖尿病環(huán)境），添加 1% 青霉素 - 鏈霉素雙抗。
   • 環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度 95% 以上，pH 維持 7.2~7.4。
   • 傳代方法：0.25% 胰酶 - EDTA 消化法，消化時間約 2~3 分鐘（鏡下觀察細胞變圓、突起收縮時終止消化），離心后重懸接種，傳代比例通常為 1:3~1:4。
2. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存液：含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基，細胞密度調(diào)整為 1×10?~5×10? cells/mL，程序降溫（-80℃過夜后轉(zhuǎn)液氮）。
   • 復(fù)蘇要點：37℃水浴快速解凍，輕柔離心去除凍存液，避免機械損傷，接種后 24 小時更換培養(yǎng)基以清除死細胞。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 糖尿病腎病研究
   • 模擬高糖、晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)的系膜細胞增殖和基質(zhì)過度合成，探究 TGF-β/Smad 通路在腎纖維化中的作用。
   • 評估降糖藥物（如 GLP-1 受體激動劑）或抗纖維化藥物（如吡非尼酮）對系膜細胞功能的調(diào)控。
2. 腎小球腎炎機制研究
   • 分析炎癥因子（如 IL-17、IFN-γ）或自身抗體誘導(dǎo)的系膜細胞活化，研究補體系統(tǒng)激活與系膜細胞損傷的關(guān)系。
   • 篩選免疫抑制劑（如環(huán)孢素 A）對系膜細胞炎癥反應(yīng)的抑制效果。
3. 細胞外基質(zhì)代謝研究
   • 探討基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）在系膜基質(zhì)降解中的平衡，研究 ECM 沉積的分子機制（如 Wnt/β-catenin 通路激活）。
4. 信號通路與藥物篩選
   • 常用于研究 PI3K/Akt、MAPK（ERK/JNK/p38）、NF-κB 等通路在系膜細胞增殖、凋亡或炎癥中的作用。
   • 高通量篩選潛在的腎臟保護劑，如抗氧化劑（N - 乙酰半胱氨酸）或抗血小板藥物。

局限性與注意事項

• 永生化影響：部分 RMC 細胞系因 SV40 轉(zhuǎn)染可能高表達大 T 抗原，導(dǎo)致 p53 等抑癌基因功能異常，與原代系膜細胞的生物學(xué)行為（如增殖調(diào)控）存在差異，需結(jié)合原代細胞驗證。
• 模型局限性：體外培養(yǎng)的系膜細胞缺乏腎小球內(nèi)復(fù)雜的細胞間相互作用（如與內(nèi)皮細胞、足細胞的接觸），研究結(jié)果需結(jié)合體內(nèi)模型（如大鼠抗 Thy1.1 腎炎模型）進一步確認。
• 培養(yǎng)條件優(yōu)化：高糖培養(yǎng)基可能加速細胞衰老，建議根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基類型，并定期通過流式細胞術(shù)或 β- 半乳糖苷酶染色檢測細胞衰老狀態(tài)。