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RNEEC/HL-036 大鼠正常子宮內膜細胞：特性、培養(yǎng)與科研應用

一、細胞基本特性與來源

二、細胞培養(yǎng)關鍵技術

1. 培養(yǎng)基優(yōu)化
   • 基礎配方：推薦使用子宮內膜細胞專用培養(yǎng)基（如 EMEM 或 DMEM/F12），添加 10% 胎牛血清（FBS）、10 ng/mL 表皮生長因子（EGF）、1 μg/mL 胰島素、100 nM 孕酮及雙抗（青霉素 100 U/mL + 鏈霉素 100 μg/mL）。
   • 激素調控：因子宮內膜細胞對性激素敏感，研究激素相關機制時需使用無血清培養(yǎng)基（如 SFM），并額外添加 10 nM 雌二醇（E?）和 1 μM 孕酮（P?）模擬體內周期環(huán)境。
2. 培養(yǎng)環(huán)境與傳代
   • 條件控制：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度≥90%；培養(yǎng)基 pH 值需維持在 7.2~7.4，避免過酸或過堿影響細胞增殖。
   • 傳代策略：當細胞融合度達 80%~90% 時，用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化 1~2 分鐘，以 1:2~1:3 比例傳代；消化時需密切觀察，避免過度消化導致細胞成團或損傷細胞膜表面激素受體。
3. 凍存與復蘇
   • 凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO，按 5×10?~1×10? cells/mL 密度分裝，經程序降溫盒（-80℃過夜）后轉入液氮保存，復蘇存活率可達 85% 以上。
   • 質量控制：每批次細胞需通過支原體檢測（如 PCR 法）、活細胞計數（臺盼藍染色）及標志物表達驗證，確保無交叉污染且表型穩(wěn)定。

三、科研應用場景與案例

1. 生殖生理與胚胎著床研究
   RNEEC/HL-036 可模擬子宮內膜 “容受性” 窗口期，用于研究胚胎著床的分子機制。例如：
   • 通過共培養(yǎng)模型探究滋養(yǎng)層細胞（如 JEG-3）與子宮內膜細胞的黏附分子（如 L-selectin、整合素 αvβ3）相互作用；
   • 利用轉錄組測序分析雌激素誘導的子宮內膜細胞分泌因子（如白血病抑制因子 LIF）變化，揭示著床失敗的潛在靶點。
     案例：某團隊通過該細胞系發(fā)現，孕激素預處理可上調子宮內膜細胞 HOXA10 基因表達，增強其對胚胎的黏附能力，為臨床輔助生殖技術中激素用藥提供了理論依據。
2. 子宮內膜疾病機制研究
   • 子宮內膜異位癥：與異位內膜細胞系（如 12Z）對比，分析正常與異位細胞的差異表達基因（如 MMPs、VEGF），探討異位病灶形成的關鍵信號通路（如 Wnt/β-catenin）；
   • 子宮內膜增生 / 癌變：通過致癌物（如雌二醇衍生物）處理，誘導細胞異常增殖，結合免疫印跡檢測 p53、PI3K/AKT 等通路變化，構建癌前病變體外模型。
     案例：在子宮內膜炎研究中，利用脂多糖（LPS）刺激 RNEEC/HL-036，發(fā)現 TLR4/MyD88 通路激活可誘導 IL-6、TNF-α 等促炎因子分泌，為抗生素聯合**治療提供了靶點。
3. 藥物篩選與毒性評估
   • 激素類藥物：測試新型孕激素受體調節(jié)劑（如 Ulipristal）對子宮內膜細胞增殖的抑制作用，通過 EdU 染色或 CCK-8 法評估藥物效力；
   • 生殖毒性化合物：檢測環(huán)境雌激素（如雙酚 A）對子宮內膜細胞激素受體表達的干擾，利用 ELISA 法分析雌激素應答基因（如 PS2、CYP19A1）的異常激活。

四、局限性與實驗注意事項

1. 種屬與個體差異：大鼠子宮內膜的激素響應模式與人存在差異（如大鼠動情周期為 4~5 天，人類為 28 天），涉及臨床轉化時需結合原代人子宮內膜細胞（hEMs）或動物模型（如大鼠異位移植模型）驗證。
2. 激素微環(huán)境模擬：體外培養(yǎng)難以完全重現體內復雜的激素網絡（如黃體生成素、前列腺素），建議采用三維培養(yǎng)（如 Matrigel 基質膠）或與成纖維細胞共培養(yǎng)，提升模型生理相關性。
3. 實驗設計要點：研究周期依賴性基因時，需同步化細胞周期（如血清饑餓法）；檢測分泌蛋白時，需使用無血清培養(yǎng)基孵育以排除血清干擾。

五、總結